浅谈双链聚肌胞检测

时间：2020-01-05

双链聚肌胞大众化的检测方法一般采用荧光增强试验、紫外特征吸收光谱试验和磷测定法、沉降系数检查法。这里主要谈一下磷测定法检验双链聚肌胞含量。

定磷法的原理是：在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当有还原剂存在时磷钼酸立即转变成蓝色的还原产物—钼蓝。钼蓝在660nm的波长处有较大吸收。

测定供试品中核酸的总磷量，需用硫酸或过氯酸消化成无机磷后再行测定.供试品中总磷量减去无机磷量.即得核酸含磷量，出此计算核酸含量。

对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾2.l95g，置500ml量瓶，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml置500ml量瓶中，加水至刻庋，摇匀(每1ml中含磷l0μg)。

总磷量测定精密量取供试品溶液1ml.置凯氏烧瓶中，加5mo/L硫酸溶液3.0ml，于l40～l60℃消化2～4小时。俟溶液呈黄褐色后，放冷，加30%过氧化氢1～2滴，继续消化，直至溶液透明。放冷后，加水0.5ml，水浴加热10分钟.放冷，转移至50ml量瓶中，加水至刻度。精密量取此溶液1ml与对照品溶液0.8ml.分别加水2.0ml、定磷试剂(6mol /L盐酸—水—2.5%钼酸破—10%抗血酸1：2：1：1)3ml，摇匀，45℃加热25分钟，立即冷至室温。照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在660nm的波长处测定吸收度，计算。

无机磷的测定精密量取供试品溶液2m}.置离心管中，加沉淀剂(取铝钼酸铵1g，加70%过氯酸l4ml、水386ml使溶解)2.0ml，摇匀，以简每分钟4000转离心15分钟，精密量取此溶液1ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取此溶液1ml，照总磷量测定项下的方法，自“分别加水2ml”起，依法测定。

核酸含磷量=总磷量一无机磷量

上面的这个就是检测双链聚肌胞含量的方法--磷测定法，这种方法本身是没有任何问题的，可是如果拿它作为检验双链聚肌胞含量的一方法，我们认为是很不妥的。磷确实是双链聚肌胞的组成部分，但是磷的增加可以有很多途径，有很多的方面可以影响到检测，所以检验双链聚肌胞时要综合考虑各种系数并做好统计，最后得出客观结论。

参考资料保定和美生物

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