有时，少即是多

时间：2014-08-21

作者：Michelle Tetreault Carlson 来源：美国MoBio实验室

数年前，一位来自加州大学伯克利分校的客户联系MOBIO技术部。她要提取西方知更鸟粪便微生物DNA。用PowerSoil Kit提取，尝试过好多次都未能成功。我们都知道粪便里头塞满了微生物DNA，DNA就在里头。我们过一遍疑难点列表：样品采集方法得当，保存得当，也正常按照说明书操作。运气那么差？真见鬼了！那到底怎么回事呢？我们从各种各样的粪便样品提取DNA一点儿问题都没有！为了找到问题所在，我们建议她邮寄少量粪便样品过来，以便做实验。

我们变换着方法：不同的研磨珠、不用的珠磨研磨时间、不同的裂解缓冲液、+/-加热等，看哪个方案可行。最后，解决办法原来如此简单！那是我们意外发现的。在实验的尾声，样品不够。为了完成最后几个实验，我们不得不减少加样量。正常情况下，我们的土壤和粪便试剂盒的较佳工作加样量大概是250mg。这次，当我们跑胶查看提取的DNA时，惊讶地发现使用较少量样品的得率居然较高！也就是说，她只要减少加样量就能获得很好的结果。说实在的，谁想要那么多便便？

这似乎看起来与我们的经验有点相悖。但由此经验延伸，其它某些类型粪便样品也适用。胎粪，婴儿哺乳动物较早的粪便，粘度很高柏油样。我们的一位美国客户试用PowerSoil DNA Isolation Kit,勇敢地接受从胎粪中直接提取DNA的任务。刚开始提不到任何可检测的DNA。因为胎粪的细菌含量很低，下意识地不断增加加样。但无论如何，什么也提不出来。然后，该客户联系到MOBIO的技术部。我们排除了所有常见原因无果。后来想到知更鸟粪便的例子，就建议他减少加样量。他把加样量减少到50mg时，突然检测到了干净的DNA！

接着，我们也看到了减少加样量同样适用于高腐植酸样品和冻干土样。使用太多样品反而导致DNA提取无法实行。那原因何在？我们也不确定，但我们估计问题可能在于我们*一**的抑制因子去除技术（IRT）。对于特定含量PCR抑制因子的样品，IRT化学试剂可络合抑制因子并通过离心与DNA分离开。但当抑制因子含量过高时，我们估计DNA会随着抑制因子一起比沉淀。在IRT步骤简单地提高溶液使用量并不能奏效。较好的解决办法是减少加样量。否则，将导致所有，至少绝大部分DNA随抑制因子被去除掉。

另外，下次使用MOBIO带有IRT技术的试剂盒时，若样品含大量PCR抑制因子（或者你觉得），尝试减少加样量。简单的方法可能可以把你的研究带回正轨。如你之前听说的，有时候少即是多，DNA就是这样。

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