如何处理高盐分土样

时间：2014-12-19

作者：Michelle Tetreault Carlson 来源：美国MoBio实验室【字号：大中小】

MO BIO技术部：

我在使用RNA Power Soil Total RNA Isolation kit处理一些高盐含量的土壤样品，结果提取出来的全是DNA而不是RNA，这是怎么回事呢？

Thao：

您好!

提取含盐量高的土壤或其它类型样品需要些技巧。RNA PowerSoil Total RNA Isolation kit(货号：12866-25）使用的是阴离子交换树脂来吸附和洗涤核酸。在低盐条件下，带负电荷的RNA/DNA被牢牢吸附绑定在带正电荷的树脂上。高盐条件下，它们彼此的极性会被掩盖。通过调节离心柱所使用缓冲液的盐浓度可控制RNA或DNA的洗脱。逐渐提高盐浓度的过程中，先洗脱下来的是RNA，然后洗脱DNA。然而，如果处理的是高盐含量的土样，会改变树脂所处的缓冲环境，这就是你现在面临的状况。土样中残留的过高盐分导致较终洗脱下来的是DNA而非RNA。

为了去除这些起干扰作用的盐份，可以对土样进行洗涤。把样品加入到15ml灭菌收集管中，再加入10ml灭菌PBS，短暂涡旋混匀，10,000 x g离心2min，弃上清。这样重复洗涤3次，效果会好很多。

祝好!

MO BIO 技术

附

金属含量高的土样也会影响试剂盒的提取效果，我们建议使用灭菌的TE缓冲液（10 mM Tris, 1 mM EDTA）对这种类型的土壤进行重复洗涤。在此，EDTA可起到螯合金属离子的作用。操作同上，将TE缓冲液和样品都加入到收集管内，涡旋混匀，然后离心沉淀细胞和土壤颗粒，弃去上清，根据实际需要可以多洗几遍。

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