HCT-116细胞复苏及培养细胞
HCT-116细胞,细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于一196~C中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二亚砜(DMSO),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入内(-196℃)。复苏细胞时则直接将装有细胞的冻存管投入40℃热水中*解冻。
HCT-116细胞,细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室.
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HCT-116细胞,细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。三室既相互连接又相对独立,各自完成培养过程中的不同操作
细胞培养室,选择独立房间,**净台应放置在比较洁净的房间,如果条件允许,按洁净厂房要求设计细胞培养室,即使房间做不到空气过滤,也至少应是**的,进出时要更换工作衣。
培养一个新的HCT-116细胞时要特别注意培养基一致性的问题。因为来自于不同厂家的培养基,即使名字相同或类似,配方也略有差异。仔细阅读说明书,配方,标签,确保使用正确的培养基,细胞能适应新的培养基。所有ATCC细胞系,在细胞信息中都注明了培养基。大多数情况下,推荐的培养基和都可以跟随细胞一起购买。
定期仔细的观察培养基中HCT-116细胞的形态和活性。肉眼观察细胞培养基,检查是否污染。这包括异常的pH变化(红色变为黄色或紫色)、浑浊度或有无颗粒。同时,仔细检查是否有小菌落,它们漂浮在液体和空气交界面。特别是要检查容器的边缘,因为这些位置不易通过显微镜被检查到。tx
HCT-116细胞,大多数原代细胞、有限传代细胞系和连续传代细胞系都是单层贴壁细胞。其他细胞,尤其是那些来自造血或某些组织,是悬浮生长的。
HCT-116细胞,任何ATCC细胞系的生长和增殖的详细信息,参见运输包装里提供的具体细胞系的产品说明书。简短版本的说明书,也可以在ATCC网站上找到。
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