原代细胞培养——百欧博伟生物

时间：2019-04-17

原代细胞培养——百欧博伟生物
原代细胞培养是指细胞分离之后至初次传代之前的细胞培养阶段。
原代细胞培养四个阶段：1.获取样品 2.分离组织3.解剖或解离组织块4.接种于培养器皿中培养
原代细胞培养种类：
1. 将组织块贴附于适宜的基质中，细胞可自组织块向外迁移生长。
2. 将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液，接种细胞悬液，其中部分细胞黏附于基质生长。
酶的种类：胰蛋白酶
          胶原酶
          弹性蛋白酶
          链酶蛋白酶
          裂解酶
          脱氧核糖核酸酶
          透明质酸酶
这些酶即可单独使用，又可联合应用。
原代细胞培养共同需要的条件：
在取材时需去除脂肪和坏死组织；
为减少对组织的损伤，需用锋利的器具；
适度离心以去除用于解离的酶；
由于原代培养组织细胞的存活率很低，原代培养的细胞密度应**正常传代培养的细胞密度；
营养丰富的培养基如Ham’s F12比简单的培养基（Eagle’s MEM）更可取。如添加血清，胎牛血清比牛或马的血清更好，细胞成活率更高。特殊细胞类型的分离可能需要选择性培养基。
与成体组织相比，原代培养时用胚胎组织更易分离，细胞更易存活，增殖速度更快。
组织分离：对人或动物组织处理之前，请确认你的工作符合医学伦理学规则和现行的动物实验法规。对人体活检或胚胎组织进行研究时获得本地伦理**、病人及其亲属的同意。
若取材部位容易被污染（如皮肤）应先用75%乙醇消毒，在无菌条件下切除组织，放在取材用转运培养基中，尽快转移至培养室。若只能延迟转移，可于4 ℃保存，不**过72h，但是转移越快存活率越高。
取材的基本要求：
速度要快，新鲜组织2h内送到实验室；
常温或者4度保存运输，切勿冻存；
严格无菌环境：所用离心管和试剂等均为无菌级，密封良好；
保存方式：液体样本采用无菌离心管（血液用抗凝管）；组织样本放入盛有2%双抗的PBS溶液的无菌离心管中，管口用封口膜封紧。
分离组织并进行原代培养，是特殊功能细胞培养的也是一个重要的阶段。
不同种类的细胞原代培养应采用相应的技术方法，选择好的途径，参考以前的相关工作文献。
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