水杨酸促进钙蛋白酶1在下丘神经元的表达

时间：2020-01-05

目的:1、研究水杨酸(Sodium salicylate, ss)对 Sprague-Dawley(SD)大鼠听力阈值以及听性脑千反应(Auditory Brainstem reflect,ABR)检测Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期以及Ⅰ-Ⅴ、Ⅲ-Ⅴ波间潜伏期改变,分析水杨酸作用不同时间后,对大鼠听力的影响。2、观察钙蛋白酶1 (calpain1)在下丘定位,以及水杨酸对SD大鼠下丘神经元calpain 1表达的影响。3、研究下丘钙蛋白酶表达量与大鼠听力损害程度的关系,探讨水杨酸听力损害与钙蛋白酶1的关系。方法:1、采用美国产Bio-logic多功能电生理仪对大鼠进行ABR检测,将听力阈值检测结果小于40dB SPL的健康成年的SD大鼠归为实验对象。2、分组取其中符合标准、雌雄不限、体重在200g到250g范围的健康成年大鼠72只,随机分为4组,每各组18只大鼠。对照组:腹腔注射生理盐水;水杨酸组(ss组):腹腔注射水杨酸:钙蛋白酶抑制剂组(ALLN组):腹腔注射钙蛋白酶抑制剂 ALLN (N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal);ss+ALLN组:同时腹腔注射水杨酸和ALLN。各组注射剂量根据每只大鼠体重计算,水杨酸注射剂量为350mg/kg-d,钙蛋白酶抑制剂注射剂量为10mg/kg·d,生理盐水注射剂量与ss注射剂量体积相同。3、检测在对各组大鼠进行处理前先适应性饲养于无特定病原体级(Specific pathogen Free, SPF)级动物房1周,并分别在注射生理盐水及药物前1天、注射1周后以及注射4周,对各组大鼠进行听性脑干反应检测每只大鼠的听力阈值,Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期以及Ⅰ-Ⅴ波、Ⅲ-Ⅴ波波间潜伏期,并在每次测量之后从每组中随机抽出6只大鼠,用4%通过心脏灌注固定后取出下丘,石蜡固定后通过*组织化学技术检测下丘钙蛋白酶1表达量。结果:1、随水杨酸应用时间增加,大鼠听力阈值明显增大(P0.01),Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期以及Ⅰ-Ⅴ、Ⅲ-Ⅴ波间潜伏期延长(P0.05)。2、在给予ss处理后,随时间增加,钙蛋白酶1在下丘神经元表达量增加(P0.01),对照组钙蛋白酶1表达量变化差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、长期应用水杨酸会导致大鼠听力阈值降低,且随着应用时间延长,大鼠听力阈值越大。2、正常情况下,钙蛋白酶1在大鼠下丘*核神经元胞质内少量表达,长时间应用ss会引起下丘*核钙蛋白酶1表达量增高,且随ss应用时间增加钙蛋白酶1表达量增高。3、下丘*核神经元内钙蛋白酶1表达量越大对大鼠听力影响越大;应用钙蛋白酶1抑制剂后可减弱ss的对大鼠的听力损害作用。
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