收购二手工业交换柱，二手DN400型交换柱优势

时间：2020-01-10

卖几台二手600型层析柱；买几台二手800型层析柱；高价收购二手DN400型

层析柱；回收二手500升层析柱。材料304/316L不锈钢，柱管卫生级，拆装

方便;便于清洗和更换，上下过滤采用不锈钢烧结网，上面配有液体分配器

，下面采用全面积渗透，筛网孔径20μm。柱层析法的分离原理是根据物质

在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被

硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时，发生一

系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程，吸附力较强的组分，移动的距

离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。
硅胶柱层析流动相：
极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性

大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
一般都是利用极性相似相容原理，看流动相与固定相的极性，大部分是固

定相的极性小于流动相，然后流动相的极性与所要洗脱的物质极性比较接

近，从而将物质洗脱下来。

柱层析技术又称柱色谱技术。在圆柱管中先填充不溶性基质，形成一个固

定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从

柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中

分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。

原理：柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分

分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被

硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时，发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸

的过程，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分

，移动的距离大，先出柱。

在分离分析特别是蛋白质分离分析中，层析是相当重要、且相当常见的一

种技术，其原理较为复杂，对人员的要求相对较高，这里只能做一个相对

简单的介绍。

一、吸附层析

1、吸附柱层析

吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以**溶剂或缓冲液为流动相构成

柱的一种层析方法。

2、薄层层析

薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流

动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成

薄层，然后按纸层析操作进行展层。

3、聚酰胺薄膜层析

聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种

氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时

，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层

剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过

程，就能导致分离物质达到分离目的。

二、离子交换层析

离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的

。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液

中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂

上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。`

三、凝胶过滤

凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进

入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层

析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

四、亲和层析

亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异

性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底

物的反应中，特异的废物（S'）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（

E－S'）一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具

有亲和力，并产生复合物。而亲和层析与酶一底物反应不同的是，前者进

行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相

存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L（对酶的配体可以是类似

底物、抑制剂或辅基等）以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M（如

活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体。而固化后

的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人小层析柱（

几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中

对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效

应等作用吸附到固相载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓

冲液洗涤出来，并形成了个层析峰。然后，恰当地改变起始缓冲液的PH值

、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离

下来，并形成了*M个层析峰（见图6－2）。显然，通过这一操作程序就可

把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固

相载体具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也

可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后，可以重复使用。

上面介绍的亲和层析法亦称特异性配体亲和层析法。除此之外，还有

一种亲和层析法叫通用性配体亲和层析法。这两种亲和层析法相比，前者

的配体一般为复杂的生命大分子物质（如抗体、受体和酶的类似底物等）

，它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单

的小分子物质（如金属、染料，以及氨基酸等），它成本低廉、具有较高

的吸附容量，通过改善吸附和脱附条件可提高层析的分辨率。

五、聚焦层析

聚焦层析也是一种柱层析。因此，它和另外的层析一样，照例具有流

动相，其流动相为　多缓冲剂，固定相为多缓冲交换剂。

聚焦层析原理可以从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三

方面来阐述。

1、PH梯度溶液的形成

在离子交换层析中，PH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如

，当使用阴离子剂进行层析时，制备PH由高到低呈线性变化的梯度溶液的

方法是，在梯度仪的混合室（这层析柱者）中装高PH溶液，而在另一室装

低PH极限溶液，然后打开层析柱的下端出口，让洗脱液连续不断地流过柱

体。这时从柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低变化的。而在聚焦层析

中，当洗脱液流进多缓冲交换剂时，由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基

团，故PH梯度溶液可以自动形成。例如，当柱中装阴离子交换剂PBE94（作

固定相）时，先用起始缓冲液（配方见表了一2）平衡到PHg，再用含PH6的

多缓冲剂物质（作流动相）的淋洗液通过柱体，这时多缓冲剂中酸性的组

分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用。随着淋洗液的不断加人，住内

每点的PH值从高到低逐渐下降。照此处理J段时间，从层析柱**部到底部就

形成了PH6～9的梯度。聚焦层析柱中的PH梯度溶液是在淋洗过程中自动形

成的，但是随着淋洗的进行，PH梯度会逐渐向下迁移，从底部流出液的PH

却由9逐渐降至6，并恒定于此值，这时层析柱的PH梯度也就消失了。

2．蛋白质的行为

蛋白质所带电荷取决于它的等电点（PI）和层析柱中的PH值。当柱中

的PH低于蛋白质的PI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离于交换剂结合。而

随着洗脱剂向前移动，固定相中的PH值是随着淋洗时间延长而变化的。当

蛋白质移动至环境PH**其PI时，蛋白质由带正电行变为带负电荷，并与

阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境PH 再次低于PI

时，它又带正电荷，并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上

述过程将反复进行，于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来，从而达

到了分离的目的。

不同蛋白质具有不同的等电点，它们在被离子交换剂结合以前，移动

之距离是不同的，洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

工业化生产用层析柱，它涉及一种应用生物制药、食品加工中的分离纯化

设备，具体涉及一种新型工业化生产用层析柱。它能克服现有技术的弊端

，减少劳动力，降低劳动强度，降低成本。

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