怎样冷冻保存蛋白胨细胞

    蛋白胨细胞的冷冻保存一直是生物科技以及医疗行业的难题,如何克服冷冻过程中的种种弊端,科学合理的冷冻蛋白胨细胞一直是业内人士追求的课题,其实蛋白胨细胞的冷冻技术也并不复杂。

    关于蛋白胨细胞的冷冻保存方法如下:

    1·传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可**过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成蛋白胨细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

    2·程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

    冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。

    配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜(DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。

    离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。

    取与蛋白胨细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSO最后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2mlial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。


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    词条说明

  • 蛋白胨与胰蛋白胨有哪些区别

    蛋白胨广义的讲是所有蛋白胨的总称。 蛋白胨一般在国产的特指:骨肉(牛)蛋白胨。进口的没有专指一个具体的一种蛋白胨,如:BD OXOID都会按照技术标准和原料的不同进行细分。蛋白胨是采用新鲜牛骨及牛肉混合提取,经过消化、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。易溶于水,水溶液呈淡黄色。其不仅含有丰富的氨基酸,特别是含硫氨基酸较多,而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是

  • 胰蛋白胨

        胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一种优质蛋白胨,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。国产的胰蛋白胨一般是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化而得到,与进口的成分和工艺不同。进口的胰蛋白胨以酪蛋白为基础进行消化,实为胰酪蛋白胨;而国产的是以肉

  • 蛋白胨的种类有哪些?

    蛋白胨的分类方法有很多种,不同方法分类可以分出好多种产品类别,常规的分类方法有按照原材料笼统分类,按照原材料细化分类以及按照使用用途等级分类以及用途的细化分类等等,说的可能比较绕口,细说一下就清楚了。按照原材料笼统分类:动物性蛋白胨、植物性蛋白胨、生物性蛋白胨等等三大类。按照原料细化分类就比较精细了:其中可分为大豆蛋白胨、牛肉蛋白胨、牛骨蛋白胨、鱼蛋白胨、猪皮蛋白胨等等,任何一种原料都可以成为一种

  • 胰蛋白胨作用

       胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨、胰酶消化酪蛋白胨,是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。   含有丰富的氮源、氨基酸等,可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。  胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业,氨基酸、**

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