游离DNA如何提取

时间：2022-04-11

BIOG产品特点
◎操作简便快速，可在半小时内获得理想的DNA；
◎提取DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.7-1.9；
◎产量更高，较国内同类产品高出20%；
◎可用于中量（0.5-1.5mL）血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等液体样本中游离DNA的提取；
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。
BIOG操作步骤
1. 请自行准备：无水乙醇、15mL离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液A：31.5mL加入13.5mL无水乙醇，混匀；63mL加入27mL无水乙醇，混匀。
b) 洗涤液B：13.5mL加入31.5mL无水乙醇，混匀；27mL加入63mL无水乙醇，混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取15mL离心管（自备），加入1500μL样本，30μLDNA Carrier混合均匀，加入1500μL 裂解液及150μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴10 分钟。
4. 加入6000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内，将4590μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，8,000 rpm离心2分钟，弃收集管内废液；
6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余4590μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。
7. 将吸附柱放回收集管内，加3750μL 洗涤液A至吸附柱内，8,000 rpm离心2分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加3750μL 洗涤液B至吸附柱内，静置2 分钟，8,000 rpm离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，8,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的15 mL收集管内，加入70μL 洗脱液(注意将洗脱液均匀加在吸附膜的中间和四周)，静置3 分钟，8,000 rpm离心3 分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
注意事项：
1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。

词条
词条说明
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