细胞计数器原理

    细胞计数器原理

        细胞培养技术中,细胞计数是一项基本功,对于标准化培养条件以及需要定量的实验来说都关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。
    制备细胞悬液:
    对于贴壁生长的细胞,我们需要使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落
    根据需要加入合适体积的培养基,将细胞进行中和及稀释,以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开,不要残留任何细胞团
    准备血细胞计数器:
    使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净
    将将盖玻片润湿(使用水或呼一口气,目的是使盖玻片与血细胞计数器接触紧密,易于粘连),并覆盖至血细胞计数器上
    台盼兰染色(可选):
    如果需要计算细胞的活力,则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合
    室温孵育3-5分钟,使台盼兰进入死细胞,使死细胞着蓝色
    血细胞计数器加样:
    使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池
    以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液
    将计数板放置几分钟使细胞扩散,同时用吸水纸吸除多余的液体
    细胞计数:
    在100倍显微镜下,移动计数板将视野对准计数板的大方块,该方块四周有一圈3条平行线包围,中间有密集的网格。方块区差不多刚好可以填满整个视野
    使用手持式计数器记录计数池四个角以及方块内的细胞数(1-5号位置,经典的current-protocol每个方块细胞数应不大于20-50),并重复记录另一侧计数池中的细胞数,总计十个方块。计数的方法是只计算上边和左边压线的细胞,而右边和下边压线的细胞不予计算(下图,总体原则是“计上不计下,计左不计右”,判断标准为是否接触三条边线的中间线)。如果有多个细胞没有吹散成团存在,此时只可记为一个细胞。如果团块很多,则可能需要重新吹打甚至消化直至绝大多数细胞为单个细胞


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    词条说明

  • 分子蒸馏技术及其应用的研究进展

    分子蒸馏(m olecular isillation是一种在高真空下进行的特殊蒸馏技术。该技术自20世纪30年代问世以来得到人们的广泛重视。20世纪60年代,此项技术已成功地应用于从浓缩鱼肝油提炼维生素A的工业化中。虽然近年来一些国家如美国、 德国、日本、瑞典、波兰以及前苏联等相继利用分子蒸馏技术解决了许多分离领域中的难题:但分子蒸馏是一项国内外正在工业化开发应用的**尚未实现大规模的工业化。

  • 分子蒸馏仪的原理和优点

    分子蒸馏仪是一种特殊的液--液分离技术,在高真空状态下,使蒸气分子的平均自由程大于蒸发表面与冷凝表面之间的距离,从而可利用料液中各组分蒸发速率的差异,对液体混合物进行分离。分子蒸馏仪工作原理:在沸腾的薄膜和冷凝面之间的压差是蒸汽流向的驱动力,对于微小的压力降就会引起蒸汽的流动。在1mbar下运行要求在沸腾面和冷凝面之间短的距离,基于这个原理制作的蒸馏器称为短程蒸馏器。短程蒸馏器(分子蒸馏)有一个内

  • 氮吹仪的应用

     氮吹仪的应用氮气是一种为常见的惰性气体,在没有的温度、压力或者是催化剂等辅助条件下,很难与外界发生反应。因此在真空系统清洗过程中,利用氮气吹扫,更为安全可靠。这一点上,也被广泛用于化工企业的管道清洁过程。其次氮气的吸附热小,吸附于物体表面的时间短。也就是说当氮气吸附于真空系统的器壁表面时,将会很容易被抽走。真空系统清洗中的氮气吹扫正式利用了它的这个特性。举个例子,在真空镀膜中,用干燥氮

  • 脂肪测定仪优点

     脂肪测定仪优点  1. 全自动脂肪测定仪,仪器温、抽提(索氏抽提,热抽提,索氏热抽提,连续流动)、冲洗、溶剂回收、预干燥、计算及打印于一体    2. 高溶剂回收率,回收率大于92%    3. 设计与较好的工艺,让实验结果相对误差小,实现了仪器高平行性的特点可单设定预干燥温度,减少提取样品脂肪损耗    4. 人

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