百萤问号：荧光鬼笔环肽及其缀合物常见问题解答

时间：2024-03-25

鬼笔环肽是鬼笔毒素家族的主要代表，是一种双环七肽，是从有毒的死亡帽蘑菇伞形毒蕈中分离出来的。它对F-肌动蛋白亚基之间的凹槽具有很高的亲和力。一旦与F-肌动蛋白结合，鬼笔环肽就会使单体和长丝的平衡向长丝位置移动，并抑制ATP水解。相互作用通过防止亚基解离来稳定肌动蛋白丝，并通过降低临界浓度促进肌动蛋白聚合。结果，这些特性使得鬼笔环肽衍生物成为可视化F-肌动蛋白和细胞骨架网络的有用染色剂。本周百萤主要想带大家了解一下关于鬼笔环肽、肌动蛋白以及染色过程中经常遇到的问题。

1.我可以用固定细胞，然后用荧光鬼笔环肽染色吗？

可以使用固定细胞。请根据实验条件选择固定方法。用甲醛、多聚甲醛或固定细胞后，用鬼笔环肽缀合物（例如鬼笔环肽-iFluor 488）染色效果较佳。

2.在用鬼笔环肽染料缀合物对肌动蛋白染色之前，应如何固定样品？

避免使用含的固定剂，因为它会在固定过程中会破坏肌动蛋白。优选的固定剂是不含的甲醛。

3.在用鬼笔环肽-iFluor 缀合物对F-肌动蛋白染色之前，我需要对石蜡包埋的组织切片进行脱石蜡处理吗？您可以提供脱石蜡方案吗？

是的，使用任何荧光鬼笔环肽缀合物对F-肌动蛋白染色，都将石蜡包埋的组织切片去石蜡（去除石蜡）。

去除组织切片的石蜡：

将切片加热到57°C持续5分钟。

将切片浸入2次中，每次5分钟。

将切片分别浸入100％，95％和70％的乙醇中，每次5分钟。

用1X PBS洗涤2次，每次5分钟。

进行F-肌动蛋白标记。

4.甲醛和多聚甲醛在细胞固定方面有什么区别？

多聚甲醛（PFA）是甲醛的聚合物。多聚甲醛本身不是固定剂，需要溶解成甲醛。可以通过加热或在碱性条件下溶解得到甲醛。

福尔马林 是饱和（37％）的名称。但是请注意，某些商业中含有以防止聚合（转化为多聚甲醛）。由于100％福尔马林含有高达15％的作为稳定剂，因此对细胞固定有很大影响。

是一种渗透剂。它可以干扰膜结合蛋白的染色，并且可以大地影响细胞骨架蛋白的染色。例如，当染色细胞F-肌动蛋白时，使用不含的甲醛固定剂。这是因为可以在固定过程中破坏F-肌动蛋白并阻止鬼笔环肽缀合物的结合。

5.鬼笔环肽对细胞渗透吗？

鬼笔环肽不是细胞可渗透的，因此不能在活细胞上使用。荧光标记的鬼笔环肽，例如Phalloidin-iFluor 488缀合物，只能在甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养和无细胞实验中用于对F-肌动蛋白染色。

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