厌氧培养箱的操作规程

时间：2022-03-16

厌氧培养箱的使用注意事项
1.仪器尽可能地安装于空气清净、温度变化较小的地方;
2.开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的使用说明，掌握正确使用方法;
3.培养物放入是在操作室内达到厌氧环境后放入;
4.如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持10小时厌氧状态（**过10小时则根据需要把培养物取出另作处理）;
5.经常注意气路有无漏气现象;
6.调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体。
7. 真空泵按要求使用，定期检查加油。
厌氧菌培养方法
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）即厌氧培养箱，是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个**玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。如有梭状芽孢杆菌。
7.疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境。
操作室厌氧环境形成：按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室内放入二个无毒塑料袋。通电源开照明灯，开控温仪，调节所需温度及安全温度。操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂,并放入美兰指示剂(封闭)。关紧取样室内外门，并抽真空校验。操作室内次置换（氮气置换）：先用橡皮管插入操作室内进气口，另一头插入塑料袋。接通氮气进气路，打开氮气控制阀，使二只塑料袋充足氮气，然后扎紧袋口。把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。把塑料袋内氮气渐渐地放于操作室内，至全部放出。操作室D二次置换（氮气置换）重复一次充氮过程，并注意随时用脚踏开关开闭排气。操作室D三次置换（混合气体置换）：（混合气体配比为：N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%）调换气路打开混合气道通阀门进气，充气时要随时脚踏开关开闭排气。混合气充满塑料袋后，关掉混合气直通阀（三通阀），使混合气经过流量计输入操作并调整流量计，流量为每分钟10毫升左右。把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于微量状态。操作室内打开钯粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示剂（美兰安瓶）观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境。开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理。灭菌时间自定。

厌氧培养箱注意事项：尽可能地安装于空气清静，温度变化较小的地方。开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的说明书、掌握正确的使用方法。培养物放入是在操作室内达到厌氧环境后放入。如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持12小时厌氧状态。（**过12小时则根据需要把培养物取出另作处理）。经常注意气路有无漏气现象。调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体。真空泵按要求使用，定期检查加油。停止使用，关闭总电源键，及设备后部的电源开关。

YQX-Ⅱ厌氧培养箱是一种在无氧环境条件下进行细菌培养及操作的装置。它能提供严格的厌氧状态恒定的温度培养条件和具有一个系统化、科学化的工作区域。在本装置内操作培养，可以培养Z难生长的厌氧生物，又能避免以往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。因此本装置是厌氧生物检测科研的理想工具。本装置也是一物多用的良好仪器，如改变操作方式，为微需氧菌的生长繁殖提供良好的生长条件。

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词条
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