SPE技术仪器装置(十）固相萃取柱的重复使用

时间：2025-01-03

柱能够多次使用。我们曾经对美国瓦瑞安公司生产的Bond Elut Certify 键合硅胶固相萃取柱的重复使用的可能性进行过评估 (J. Chromatogr. 137:619 ; 1993)。当样品基液是血浆时，这种固相萃取柱在经过再生后可重复使用2-3次 (保持80%以上的回收率)。也有人报道固相萃取柱可重复使用10次 (J. Chromatogr. 307:371 ;1986)。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相对较为容易，反复使用的次数也会多一些。有人曾经试验重复使用这种固相萃取柱15次之多。对固相萃取柱的重复使用在很大程度上取决于样品基液的复杂程度。样品基液越复杂，SPE柱重复使用的可能性就越小。
固相萃取膜片(SPE disk)的重复使用也是如此，在很大程度上取决于样品基质。如果样品中的干扰物在固相萃取膜片上不保留，或虽然保留，但通过yi定的清洗、再生溶剂处理后能够基本恢复其原有的功能，则可以考虑重复使用。有的可以重复使用高达10次。
对固相萃取材料的重复使用谨慎。先，使用过的固相萃取柱进行再生。而且Z好是在使用完后马上进行再生。其次，对再生后的固相萃取柱进行评估以其本底和回收率都可以接受。另外，还要考虑一下再生的成本是否值得。
SPE技术仪器装置(十）固相萃取柱的重复使用

11. 固相萃取中的常见问题
问题原因解决方法
在用反相SPE柱萃取时，洗脱馏份中有水。 1. 分析物洗脱之前SPE柱没有很好的干燥。
1. 用氮气或空气干燥SPE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水将SPE柱上的残留水分除去。
Z后馏份中含有干扰物。 1. 干扰物与分析物被同时洗脱。

2. 干扰物来自SPE柱。 1. 在洗脱分析物之前选用中等性的溶剂将干扰物洗涤出SPE柱。可将两种或多中兼容的溶剂混合以达到不同的性。
选用对分析物亲合力大而对干扰物亲合力低的SPE柱。
用两根不同性的SPE柱以除去干扰物。如反相柱然后离子交换柱或硅胶柱。
2. 在柱子预处理之前用洗脱溶剂洗涤SPE柱。
SPE柱流速降低或阻塞。 1. 样品存在过多的颗粒。
2. 样品溶液粘度太大。 1. 对样品进行过滤或离心。
2. 用溶剂对样品进行稀释。
反相柱从固态样品中用萃取非性分析物。 1. 分析物不在液体溶液中。
1. 用甲醇、异丙醇或乙腈对样品进行均浆处理。然后过滤或离心，再用水对清液进行稀释为含水量为70-90%的水溶液。
用正相柱从固态样品中萃取分析物。 1. 分析物不在液体溶液中。
1. 用非性溶剂 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均浆。
用正相柱从脂肪样品中萃取分析物。 1. 脂肪可与分析物一起被洗脱出来或降低SPE柱的吸附容量。 1. 用正己烷溶解脂肪。冰冻除去凝结的脂肪。
用反相柱从含蛋白质的溶液中(血、血清、血浆)萃取分析物。 1. 分析物与蛋白质键合使分析物通过SPE柱而没有被保留。
1. 通过改变样品的pH值或用水对样品稀释破坏蛋白键合。
2. 加酸除蛋白质 (如: HCIO4、TFA、TCA)。
3. 加溶剂除蛋白质 (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。离心、然后用水或缓冲溶液将上清液稀释至溶剂含量少于10%。
从含有表面活性剂的溶液中萃取分析物。 1. 表面活性剂与SPE柱表面起作用。 1. 如果分析物是非离子状态，可用离子交换柱除去表面活性剂离子。
2. 用二醇基柱除去非离子化的表面活性剂。
用常规柱 (60Å)萃。取蛋白质的回收率低。 1. 蛋白质体积太大不能进入萃取柱的微孔。
2. 蛋白质不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白质在SPE柱担体微孔内变性。 1. 用BAKERBOND大孔径反相柱或离子交换柱。
2. 用BAKERBOND大孔径反相柱或离子交换柱。
分析物回收率低
被吸附在萃取柱上
(如分析物与基液一起通过SPE柱) 1. SPE柱没有很好地被预处理。
2. SPE柱的性不合适。
3. 分析物对样品溶液的亲合力远远大于对SPE柱的亲合力。
4. 当大体积水样品。
5. 通过SPE柱时，反相柱担体失去柱子预处理时留下的甲醇。 1. 反相柱: 用甲醇、异丙醇或乙腈处理柱子，然后用稀释样品的溶剂处理柱子。注意不能让SPE柱变干。
2. 选择对分析物有明显选择性的SPE柱。
3. 改变性或样品溶液的pH使分析物在样品溶液中的亲合力降低。
4. 在样品溶液中加入1-2%的甲醇或异丙醇或乙腈。
分析物回收率低
分析物没有被洗脱出SPE柱 1. SPE柱的性不合适。
2. 洗脱溶剂不够强，无法将分析物从SPE柱上洗脱。
3. 洗脱溶剂体积太小
4. 分析物被不可逆地吸附在SPE担体上。担体-分析物作用力太强。 1. 选择其它低性或选择性弱的SPE柱。
2. 改变洗脱溶剂的pH值以增加其对分析物的亲合力。
3. 增加溶剂体积。
4. 反相: 选择疏水性弱的担体。如果原来用的是C18，则改为C8、C2或CN。
阳离子交换: 用羧酸取代苯磺酸。
阴离子交换: 用伯、仲胺代替叔胺。
萃取重现性差 1. 在添加样品之前SPE柱已枯。
2. SPE柱容量。
3. 样品过柱流速太快。
4. 洗脱液流速太快。
5. 分析物在样品中的溶解度太大，分析物在样品过柱时与样品同时通过柱子而没有被保留。
6. SPE柱用性溶剂处理而洗脱溶剂是不兼容的非性溶剂。
7. 洗涤杂质用的溶剂太强，部分分析物与杂质同时被从SPE柱洗涤。分析物在这一步损失的多少取决于洗涤溶剂的流速、SPE的特性以及洗涤溶剂的体积。
8. 洗脱剂的体积太小。 1. 重新进行SPE柱预处理。
2. 减少样品量或选择大容量柱。
3. 降低流速。离子交换时流速应5 mL/min。
4.在使用外力之前让洗脱液渗透过柱。两次500微升洗脱可能比一次1000微升有效。
5. 通过改变样品性或pH值而改变分析物的溶解度。
6. 在使用非性溶剂之前对SPE柱进行干燥。

7. 降低洗涤溶剂的强度。

8. 增加洗脱溶剂的体积。
SPE技术仪器装置(十）固相萃取柱的重复使用
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