二手发酵罐的灭菌操作及发酵过程的操作看这里！

时间：2018-12-02

作者：山东优信二手设备购销有限公司

一、发酵罐灭菌操作

1.关闭所有供水管路及空气管路。开启蒸汽管路阀门。同时稍开启发酵罐夹套的排气阀门，排放夹套剩水。

2.开启发酵罐搅拌电机，转速至200rpm，使发酵液受热均匀。当温度升到95℃以上时，即可停止搅拌。然后待温度升至121℃（罐压在0.1——0.12Mpa）时即可计时开始。

3.当计时开始后，发酵时间一般为20-30分钟。在此时间内应保证温度不低于120℃。同时可进行空气过滤器及空气管道的灭菌。

4.空气过滤器及空气管道的灭菌：稍开过滤器的排水阀门，及空气管道的隔膜阀，保证空气管道的蒸汽灭菌。但不能开的太大，以免蒸汽大量进入罐内，而稀释培养基。

5.出料、采样阀的蒸汽阀门及出口阀稍开，保证该管路灭菌。在发酵罐的盖上的接种口，同样需要放气，使其达到灭菌要求。

6.当保温结束时，应先把空气管路中的隔膜阀关闭。把空气过滤器排水阀关闭，以及关闭取样阀出口阀门和接种口螺帽。然后再关闭各路蒸汽阀门。

7.打开冷却水阀门及排水阀门，同时打开空气流量计和空气放空阀门，把空气过滤器吹干。此时必须注意罐压的变化。**不能让罐压低于0.02Mpa。及当罐压达到0.05Mpa时，立即将空气管路打开，保证发酵罐的罐压在0.05Mpa左右。

8.当温度降到95℃时，即可打开搅拌。当温度低于50℃后，即可切入自动控温状态，使培养基达到接种温度，灭菌过程即告结束。

二、发酵罐发酵过程的操作

1.接种：接种方法可采用火焰接种法或差压接种法。

（1）火焰接种法：在接种口用酒精火圈消毒，然后打开接种口盖，迅速将接种液倒入罐内，在把盖拧紧。

（2）差压法：在灭菌前放入垫片，接种时把接种口盖打开，先倒入一定量的酒精消毒。待片刻后把种液瓶的针头插入接种口的垫片。利用罐内压力和种液瓶内的压力差，将种液引入罐内，拧紧盖子。

2.罐压

发酵过程中须手动控制罐压，即用出口阀控制罐内压力。调节空气流量的，须同时调节出口阀，应保持罐内压力恒定大于0.03Mpa。

3.溶解氧（DO）的测量和控制

（1）溶解氧的标定：在接种前，在恒定的发酵温度下，将转速及空气量开到较大值时的溶解氧DO值作为**。

（2）发酵罐发酵过程的溶解氧DO测量和控制：DO的控制可采用调节空气流量和调节转速来达到。较简单是转速和溶氧的关联控制。其次则必须同时调节进气量（手动）控制。有时需要通入纯氧（如在某些基因工程菌的高密度培养中）才能达到要求的DO值。

4.pH的测量与控制

（1）pH值的校正：在灭菌前应对PH电极进行PH值的校正。

（2）发酵罐在发酵过程中PH值的控制使用蠕动泵的加酸加碱来达到的，酸瓶或碱瓶须先在灭菌锅中灭菌。

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