PIPES缓冲液制备高效率感受态方法

时间：2022-01-10作者：湖北新德晟材料科技有限公司浏览：11

哌嗪二乙磺酸PIPES有多种缓冲液体系，其中缓冲溶液Transformation Buffer（也叫TB溶液）可用于制备高效率感受态的细胞。

感受态是指细胞（或细菌）能够从周围环境中摄取DNA分子，并且不易被细胞内的限制性核酸内切酶分解时所处的一种特殊生理状态。有些细菌是自然感受态，如枯草芽孢杆菌，有些是人工感受态，如大肠杆菌。经过特殊方法处理受体细胞，可改变细胞膜通透性，使其成为容许有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。

Transformation Buffer制备：

配制哌嗪二乙磺酸PIPES 3.0g 10mM、CaCl2·2H2O 2.2g 15mM、KCl 18.6g 250mM，加水 950ml，用5N KOH 调PH至6.7-6.8*低PH不溶，再加终浓度为55mM的MnCl2·4H2O 10.9g定溶到1升，过滤灭菌，4度保存。

感受态细菌细胞的转化采用氯化钙的方法。液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌，在LB平板上划线，37度过夜至长出单菌落。挑直径1-3mm 的菌落接种到250ml/3L锥形瓶或80ml/1L 锥形瓶的SOB培养基。在18度150-250RPM 培养19-50h。当OD600约0.4-0.8时停止培养，放在4度冰水中冷却10min，300RPM离心15min，回收菌体去掉上清后，用1/3体积的冰冷TB溶液悬浮，在冷10min再次离心回收菌体用1/12.5体积的TB悬浮，添加较终浓度为7%的DMSO，再冷却10分钟0.1-1ml 分装，直接在液氮或-80度保存。

悬浮大肠杆菌的TB溶液中，主要其作用成分包括缓冲液PIPES和使细胞转化成感受态的氯化钙。需要注意的是，该方法适用不含有质粒的大肠杆菌菌株，而不适合大质粒，冻存后转化效率有降低的可能。另外，不同细菌菌株的较适宜OD600也是是不同的，需要根据不同试验调整。

用TB制备感受态细胞的方法还有很多，不同的方法效率高低可能有差异，适用的菌种或细胞类型也可能不同。德晟生产的PIPES为粉末试剂，可根据不同的需求自行配制感受态TB溶液。


专注于等

• 词条

  词条说明

• 我们生活中的卡波姆在哪里？

  卡波姆是什么？其实我们很多人并不懂，如果要我们从性角度出发去跟大家分析卡波姆，估计很多人可能还是没有办法理解，毕竟不知道他的人根本就没办法想象。不过这都不是重点，重点是大家只要明白卡波姆在我们生活中的功效与作用体现在哪里，然后将它好好运用起来就可以了。 卡波姆的功效与作用 1、保护肌肤 卡波姆对人类的肌肤有明显保护作用，它对人类的皮肤有一定的亲和力，平时人们把它加入到化妆品中，它能让化妆品中的多种

• 卡波姆980是什么

  相信之前提到卡波姆980很多人会像我一样有很多疑问，卡波姆980是什么？是用来干什么的呢？因为疫情原因，很多东西开始被越来越多的人关注，其中包括卡波姆。常用的有卡波姆910、934、 934P、940、941、971P、974P等型号，今天我们了解下卡波姆980。卡波姆卡波姆980英文名称Carbome980，直译过来中文卡波姆980，也可叫卡波姆树脂，其CAS为9003-01-4。 卡波姆可溶

• Good’s缓冲液TRIS、 HEPES、TAPS成团出道

  这几年*的娱乐节目就是关于成团的选秀节目。不管是我们不认识的小哥哥小姐姐还是我们有一定了解的大哥哥大姐姐，都跟上了成团的浪潮。今天我也接着这个机会带大家认识一下德晟生产Good’s缓冲液中的团队产品TRIS、 HEPES、TAPS。TRIS（三羟甲基氨基甲烷）：弱碱性，在25°C下pKa为8.1，其缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0~9.2之间。常在电泳和凝胶实验中起缓冲作用，并被广泛用

• HEPES对于金纳米星的形成与稳定有怎样的作用？

  金纳米星，可能有许多人还不知道是何物质。金纳米星是指被塑造成星状物的金微粒，金微粒能够被送往一个**，进而被激光或磁场所操控，并终通过加热恶性**细胞来消灭它们。纳米金星使燃烧热。纳米金星是攻击癌症的一种新材料，如今，研究人员指出，金微粒如果被塑造成星状物则能够燃烧得热。而其中合成金纳米星的常用方法是采用Good’s缓冲液HEPES、EPPS以及MOPS的无核和无表面活性剂的策略。这些试剂可以作为