Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS,均为生物化学实验和分子生物学实验中经常使用的缓冲剂,它们的分子结构中都含有Tris的分子结构。那么在使用中这几种缓冲剂与Tris有哪些差异呢?它们各自之间又有哪些相同或不同之处呢?这里对这几种缓冲剂进行总结。
Tris
三羟(Tris),25°C下的pKa为8.06,缓冲范围7.0~9.0。其常用实验如下:
(1)常用于凝胶电泳缓冲液中,例如TAE或TBE;
(2)常用于制备Laemmli缓冲液;
(3)常与甘氨酸和SDS一起制备运行缓冲液和上样缓冲液;
(4)可以用作阴离子交换层析中的结合缓冲液和洗脱液;
(5)被用作RNA杂交和DNA裂解的缓冲液。
在Tris的使用中,需要注意:Tris缓冲液的pH值受温度和浓度影响很大,因此在配制过程中要考虑使用环境;Tris的伯胺基在一定程度上与各种分子反应,包括RNA酶抑制剂,醛,常见金属如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,酶,以及DNA,此外,Tris不适用于二(BCA)测定。
Bis-Tris
Bis-Tris,双(2-羟乙基)氨基(三羟),两性离子缓冲剂,25°C下pKa为6.46,pH缓冲范围为5.8~7.2。其应用领域如下:
(1)作为各种类型电泳的样品缓冲液,凝胶缓冲液和运行缓冲液;
(2)作为阴离子交换色谱法中的缓冲液;
(3)被用于卤代烷烃脱卤酶结晶过程的X射线晶体学研究;
(4)低导电性和高灵敏度,是NMR光谱的有效缓冲液;
(5)与人肝脏型脂肪酸结合蛋白(FAB)相互作用并影响蛋白质动力学。
Bis-Tris能与Cu2+和Pb2+形成强复合物,与许多常见金属形成弱复合物,因此在含有金属离子的溶液中使用时,应考虑其络合常数。此外,在有压力变化的体系中,可使用Bis-Tris缓冲溶液。Bis-Tris可替代高毒性盐缓冲剂,但同样不适用于二(BCA)测定。
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