Tris饱和是如何配制的

时间：2022-01-25

Tris饱和为浅黄色透明液体，下层为相，，上层为Tris 缓冲液pH>7.8，是用Tris-HCl（pH8.0）饱和过的重蒸，有刺激性气味，内加有抗氧化的8-羟基。Tris饱和用于分离DNA。

Tris饱和的配置：冰箱取出重蒸,室温放置，之后68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂，加8－羟基至0.1％和β－巯基至0.2％,（原液14.4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色液，弃上层、加固体Tris 约 1g/100ml,摇匀，去水相、加 0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡数次，至 PH 为 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中4 度保存。

组织裂解液，确保pH为8.0左右(可加入0.1体积的1M Tris-HCl，pH8.0，将其调为8.0左右)，再加入0.5体积的Tris饱和（使用时静置，取下层相使用。上层为Tris-HCl溶液，是为阻止与空气接触，以减缓的氧化），0.5 体积：(24：1) ，振荡10秒钟后冰浴15分钟。离心后取水相（上层）加等体积沉淀 DNA，75%漂洗1次，微干燥后溶于适量TE中备用。

Tris饱和一般PH大于7.8，用于DNA 的提取。其中，是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出，而Tris的主要作用是防治止类氧化，若类氧化，则会形成醌（两个环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于**相，从而分离上清，即可得到 DNA。

Tris平衡有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色，表明已发生氧化，不能继续使用。

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