近期了解到有实验人员反应,作WB实验有失败的情况,怀疑与实验中使用的缓冲剂有关,可能是缓冲剂未灭菌或配制成溶液后感染了细菌导致的。那么WB实验的失败是否真的与缓冲剂染菌造成的呢?
WB实验即western blot蛋白质印迹实验,或称为*印迹实验,是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。WB实验失败的原因有很多,缓冲剂只是其中一个影响因素。
缓冲剂长菌对WB实验影响
WB实验通常是不要求在无菌条件下操作的,因为本实验基本不会受到影响。基本可以确定,WB实验的失败不会是因为缓冲剂染菌导致,是其它原因。缓冲剂里即使有残留的细菌,其含有的蛋白质量是较少的,如果对实验产生影响,那么缓冲剂肯定早已经严重变质了,会直接注意到而不会使用。缓冲剂在发生这么严重的污染之前应该早就用完了。
缓冲剂离子强度对WB实验影响
缓冲剂未灭菌虽然对WB实验不会造成影响,不过其离子强度不合适有可能会造成WB实验失败。实验中通常是采用Tris作为缓冲剂,它有着较低的离子强度,不过在电泳过程中,通常会增加氯化,以提高离子强度加快电泳速率。而离子强度过高的话可能造对蛋白质造成影响,使WB实验失败。另外也要控制好缓冲剂pH值,这对WB实验至关重要。
所以说缓冲剂未灭菌或染菌与WB实验失败关系不大,更应该考虑缓冲剂的离子强度、pH值是否合适或者样品制备等问题。德晟是生物缓冲剂原料,可大量提供Tris、CAPS、MOPS等缓冲剂原料。
词条
词条说明
一、预期用途:本产品适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作。可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。二、采集方法:1.咽拭子:用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双 侧咽扁桃体及咽后壁,将拭子头浸入含3ml病毒保存液(也可使 用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液)的管中,尾部弃 去,旋紧管盖。2.鼻拭子:将1根聚丙
在各种非放*分析方法中,化学发光*分析(CLIA)具有灵敏度高、检测范围宽、精密度好、标记物稳定、可实现全自动化、应用范围广等优点,以吖啶酯衍生物为发光标记物的CLIA的特点是:标记简单、标记物稳定、不需要催化剂、自然本底低、受外界干扰因素少、信噪比高、发光体系简单等。吖啶酯是吖啶盐的一个总称,指一类可用作化学发光标记物的化学物质,吖啶酯有多个不同的系列,包括吖啶盐DMAE-NHS、吖啶酯NS
在回答病毒保存液和细胞保存液有何区别之前,首先我们要知道到底什么是病毒保存液,病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作,是采样管内浸末采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体,可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。通常分为两种,一种是非灭活型,能够保护病毒的蛋白和核酸,另一种是灭活型,通常含有灭活病毒的
三(羟甲基)氨基甲烷简称Tris,CAS77-86-1,也叫氨丁三醇,是一种常用的试剂,在工业合成、生化检测、生物制药领域都有广泛应用,Tris除此还可用来制备纳米金颗粒。 三(羟甲基)氨基甲烷作为常用的缓冲液的制备原料被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中。Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间体。由于它具有三个同等地位的羟基,同时也可作为一种良好的还原剂。其在氢氧化钠的碱性条
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