能够阻止血液凝固的化学试剂或物质,称为抗凝剂或抗凝物质,如**抗凝剂(肝素,水蛭素等)、Ca2+鳌合剂(柠檬酸,)。一般常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四盐(EDTA盐)、枸橼酸盐、草酸盐等4种, 实际应用中要根据不同的需要进行选择,才能获得理想的效果。下面德晟整理了它们的应用特点分述如下:
一、肝素
肝素是用于血液化学成分检测的可以选择抗凝剂。肝素是一种含有酸基团的粘多糖,是分散相物质平均分子质量为15000。其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化,加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。此外,肝素还能借助血浆辅助因子(肝素辅助因子Ⅱ)来抑制凝血酶。常用肝素抗凝剂是肝素的、、、铵盐,其中以肝素较好,但其价格较贵,、盐会增加血液中的、含量,铵盐会增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的剂量为10.0~12.5 IU/ml血液。
肝素对血液成分干扰较少,不影响红细胞体积,不引起溶血,适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。但肝素具有抗凝血酶作用,不适合做血凝试验。另外,肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少,所以不适合做白细胞分类和血小板计数,更不能用于止血检验。此外,肝素抗凝血不能用于制作血涂片,因为Wright染色后出现深蓝色背景,影响显微镜减产。肝素抗凝血应于短时间内使用,否则放置过久血液又可凝固。
二、乙二胺四盐(EDTA盐)
EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物,凝血过程被阻断,血液不能发生凝固。EDTA盐有、、盐,国际血液学标准化**推荐使用的是EDTA-K2,其溶解度较高,抗凝速度较快。EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液,每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA盐可在100℃下干燥,抗凝作用不变。
此抗凝剂不影响白细胞计数及大小,对红细胞形态影响较小,并且可以抑制血小板的聚集,适用于一般血液学检测。但如果抗凝剂浓度过高,渗透压上升,会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大,低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀,采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降,同时使肌酸激酶、碱性酶降低,EDTA-K2的较佳浓度为1.5mg/ml血液,如果血少,中性粒细胞会肿胀分叶消失,血小板会肿胀、崩解,产生正常血小板的碎片,使分析结果产生错误。EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合,不适于血凝和血小板功能检测,也不适用于钙、、及含氮物质的测定。此外EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子,故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。
三、枸橼酸盐
枸橼酸盐主要是枸橼酸,其抗凝原理是能与血液中的Ca2+结合形成螯合物,使Ca2+失去凝血功能,凝血过程被阻断,从而阻止血液凝固。枸橼酸有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O两种晶体,通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液,与血液按照1:9体积混合。
大部分凝血试验都可用枸橼酸抗凝,它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的稳定,并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小,可用于血小板功能分析。枸橼酸细胞毒性较小,也是输血中血液保养液的成分之一。但是,枸橼酸6mg才能抗凝1ml血液,碱性强,不适用于血液化验和生化测验。
四、草酸盐
草酸盐也是常用的抗凝剂,优点是溶解度大,其作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血功能,凝血过程被阻断。常用的草酸盐抗凝剂种类有草酸、草酸和草酸铵,草酸的常用浓度为O.1 mol/L,与血液按1:9比例使用。但是高浓度k+或Na+易使血细胞脱水皱缩,而草酸铵则可使血细胞膨胀,故测定血细胞比容时用草酸铵与草酸或草酸两者适当比例混合的抗凝剂,恰好不影响红细胞的形态和体积。常用于血液生化测定,但不适用于K+、Ca 2+的测定。由于生成草酸钙沉淀,红细胞会出现锯齿状,白细胞出现空泡,淋巴细胞及单核细胞会变形,不宜做血片检查。草酸盐可使血小板聚集,并影响白细胞形态,不能用于白细胞和血小板分类计数。
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三(羟甲基)氨基甲烷简称Tris,CAS77-86-1,也叫氨丁三醇,是一种常用的试剂,在工业合成、生化检测、生物制药领域都有广泛应用,Tris除此还可用来制备纳米金颗粒。 三(羟甲基)氨基甲烷作为常用的缓冲液的制备原料被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中。Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间体。由于它具有三个同等地位的羟基,同时也可作为一种良好的还原剂。其在氢氧化钠的碱性条
Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷; 氨基丁三醇;缓血酸胺;2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,对铜、铝有腐蚀作用,有刺激性的化学物质。 Tris有很高的缓冲能力,在水中溶解度高,对很多酶反应是惰性的,使Tris成为用于许多生化目的非常满意的缓冲液。一般用于稳定反应体系的pH,在pH7.5-9.0之间有较强的缓冲能力。 Tris缓冲液
现在市场上有很多企业宣传灭活型病毒保存液,表示与非灭活型相比有很多优点,用在病毒采样管里是更好的选择,真的是这样吗?答案显然是否定的,两者有着各自不同的特点,有着不同的应用方向。两种类型的保存液都是有必要的,这是有不同的实验目的和不同的检测情况决定的,这一点可以从两者的区别比较就可以看出来,虽然有时可以替换使用,但需要根据不同的病毒保存液类型调整实验检测方案。灭活型病毒保存液:主要是核酸提取裂解液
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