1.百萤 新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM概述
新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显亮,并提供高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。
除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂,可与荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。
2.百萤 新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM参数
Ex(nm) | 493 |
Em(nm) | 515 |
分子量 | 1090.90 |
溶 剂 | DMSO |
存储条件 | 在-15℃以下保存,避光防潮 |
3.百萤 新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM适用仪器
流式细胞仪
Ex: 488nm
Em: 530/30nm
通道: FITC通道
荧光显微镜
Ex: FITC滤波片组
Em: FITC滤波片组
孔板: 黑色透明底板
荧光酶标仪
Ex: 490nm
Em: 525nm
Cutoff: 515nm
孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
词条
词条说明
实验共分两天来做效果佳1、脱水(1)、65℃烤箱干烤30min。(具体时间视切片大小多少可调整,一般不要过1h,否则脱片)(2)、Ⅰ中15min,之后Ⅱ中15min。(3)、在Ⅰ,Ⅱ,95%酒精,80%酒精,70%酒精中分别浸泡各5min。(2、3这两步都是跑缸的,实验室应该有专门的缸,直接放里面就行了)(4)、双蒸水浸泡5min2、微波修复抗原:将切片浸入pH6.0,0.01M枸橼酸修复液中(配
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