三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）作为诊断试剂原料的重要性

时间：2022-02-18

三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）是一种无色、无味、易溶于水的弱还原性物质，在空气和水溶液中具有较高的稳定性，受温度和浓度的影响小。三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）反应活性温和、易溶、毒性小，易于操作，是一种重要且用途广泛的化学试剂。

三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）是一种新型的疏基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下，这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率。而在DNA溶液中加入三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP），反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。

三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。在质谱应用中比DTT更稳定，且还原能力强，作用可以维持2-3周，被认为是DTT的理想替代品。

高悦^[1]将三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）用于检测同型半胱氨酸（Hcy）的试剂盒的中，具有十分重要的临床意义。

血浆中的同型半胱氨酸分两种形式存在：氧化型同型半胱氨酸和还原型同型半胱氨酸。还原型同型半胱氨酸中游离的巯基具有高度活性，其容易氧化，从而形成二硫化物的形式。氧化型同型半胱氨酸是同型半胱氨酸在血浆中的主要存在形式，以二硫化物形式或是与蛋白质共价结合的形式存在。

试剂盒的检测原理是在三(2-羰基乙基)磷盐酸盐(TCEP)的作用下，氧化型同型半胱氨酸被转化为游离型Hcy，游离型Hcy与S-腺苷甲硫氨酸(SAM)在Hcy甲基转移酶(HMTase)的催化下反应生成蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。SAH被S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHase)水解成腺苷和Hcy，形成的Hcy可以循环加入反应(同型半胱氨酸的量被循环放大)，从而放大了检测信号。同时进一步偶联NADH的脱氢反应。产物腺苷旋即被水解为次黄嘌呤和氨，氨在谷氨酸脱氢酶(GLDH)的作用下，使NADH转化为NAD+，样本中的Hcy含量与NADH的变化成正比。在340nm波长下，通过与同样处理的校准品对照，测定出样品中HCY的含量。

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