免疫学检测方法

时间：2022-06-07

免疫学检测方法是实验室较常用的检测方法，从凝集试验、胶体金到ELISA。未来，随着检测方法向高通量、自动化方向发展，化学发光法将是大势所趋！

概括：

化学发光技术壁垒高的根本原因是：1）被检测物质浓度低（μg/L—pg/L），导致整个检测系统的精度要求很高，仪器封闭及试剂系统；2）整个检测过程步骤多，难以实现自动化；3）包括生物学、化学、物理学、光学等学科在内的多种*技术缺一不可。

国内外主流试剂技术大同小异，主流包括直接化学发光（异鲁米诺（新工业）、吖啶酯（雅培））、间接（酶促）化学发光（丹纳赫、迈瑞、安图）、电化学发光化学（罗氏）等。各有优劣，技术更新换代趋势不明显，但电化学发光被认为是*三代技术，在技术上略良好。

试剂的性能包括准确度、灵敏度、线性范围、抗干扰能力、储存稳定性、开瓶稳定性、试剂盒规格等；机器的性能包括检测速度、试剂位置、样品位置、仪器尺寸等，准确度是核心与认证产品对比得出的；其他性能间接影响精度，需要结合具体项目标准、厂家性能和客户需求综合评价。

化学发光有什么作用？

化学发光在临床实践中得到广泛应用。化学发光是一种免疫诊断。它是利用抗原和抗体之间的特异性反应来确定体内疾病标志物的浓度，从而判断人体的身体状态的一种诊断方法。广泛应用于传染病、心脏病、**、妊娠检测等。

有100多个免疫检测标志物。根据它们在免疫反应中的作用，标记物可分为抗体和抗原。抗原包括大分子抗原和小分子抗原。

化学发光原理

免疫反应。抗原进入人体，**人体的免疫系统，使其产生免疫反应，称为免疫反应。免疫反应包括对抗原物质的诱导、反应和作用三个连续阶段。

免疫测定（IA）。在临床试验中，根据抗原与其配对抗体的特异性反应，用已知的抗原或抗体对体液中的抗体或抗原物质进行检测和分析。

特异性高。抗原-抗体结合基本上仅发生在抗原的抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上的互补关系，抗原抗体反应具有高度的特异性。抗原抗体反应的高特异性是免疫学检测的基础。

亲和力高。抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一个动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab。高亲和力抗体的抗原结合位点和抗原的决定簇在空间构型上非常合适，两者结合牢固，不易解离。

免疫分析技术的发展：

美国临床化学会议规定所有测量光子计数的方法都是化学发光法。

化学发光与ELISA相比的进步：

1.全自动化——机械自动化；

2.定量技术优化：利用化学发光精确计算光子数——光学；

3.磁粉的应用——材料；

4.抗体标记技术的进展——生物化学。

五种免疫诊断方法比较：化学发光是趋势

与其他免疫诊断方法相比，化学发光法以其在安全性、自动化操作、准确度、速度等方面的系统优势成为免疫诊断的主流。

化学发光步骤很多。

化学发光原理解析：以酶法（一步法）为例

按冲洗次数可分为一步法、二步法、三步法等，四步法；

各组分用量在5~200uL水平；

所有过程都需要在特定温度下进行；

样品中与检测到的抗原/抗体结构相似的物质对结果的影响较大；

磁粉标记-分离技术

磁性颗粒是指表面带有活性基团的纳米级磁性颗粒；

磁性颗粒可以使用表面上的活性基团与抗体、抗原和链霉亲和素连接；

随着磁粉技术的发展，板式发光已基本被取代。

磁粉分离技术特点：

•与微孔板相比，扩大了抗原抗体结合的表面积，增加了抗原或抗体的结合能力，提高了检测灵敏度。

• 加快反应速度，快速捕获抗原和抗体。

•易于分离结合相和自由相，提高检测精度

酶标技术、可追溯性和试剂盒开发的难点

酶标技术

抗体/抗原表面有多个活化基团（氨基/羧基），酶与抗体通过这些基团连接称为酶标；

酶标签分为大分子和大分子标签，大分子和小分子标签；

交联度对试剂盒的性能有重要影响。

套件的开发

多重变量：抗体对的配对、“磁珠”和“酶标”的稀释度、合适的“配方”溶液、其他试剂盒成分、孵育时间

测试结果的可追溯性

将开发的试剂盒的测试结果与对照结果相关联

标准品稳定性难

不同厂家测试结果的**值可能不同

主流化学发光技术各有千秋

化学发光的基本原理：由于化学反应（通常为氧化）。

吖啶酯、ALP和HRP发光系统的原理

电化学发光原理

各系统优缺点对比

五种主流照明技术各有优缺点

• 总体而言，五种主流的发光技术各有优缺点。不能说技术优劣，但从市场来看，罗氏电化学发光技术的市场认可度略良好；

• 从国外四位硕士的优势项目对比来看，罗氏（电化学）在**项目中占优势，雅培（吖啶酯）在传染病项目中占优势，丹纳赫（ALP）在甲状腺激素项目中可以也可以看出，以国外各大厂商为代表的技术并不能占据**优势；

•相比不同类型技术的差异，国内厂商更看重产品研发和质量控制能力。

化学发光试剂的性能评价与比较：

•准确度是评价试剂性能的主要指标。所有指标都体现在是否准确上。但是，因为每个marker都有一定的特异性，客户不能根据某个结果是否正确来评价厂家的产品——化学发光的结果只能作为参考，不能作为金标准；

• 根据与国外厂商的对比结果判断国内厂商结果的准确性，线性系数R2、显着性水平是重要指标；

• 除了准确度，试剂盒的灵敏度、重复性、线性范围、抗干扰能力、储存稳定性、开机稳定性、包装体积等20余项参数都是试剂盒的评价指标。

除了仪器和试剂的性能对比外，装机容量、单机使用量、项目总数、项目发布、三级医院使用率等数据对于评估厂商产品也很重要，综合需要评估。

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关键词：纺织品检测生物降解塑料检测病毒污染检测

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