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这项研究在SpragueDawley大鼠中进行。在来自武汉大学口腔医无特定病原体动物实验室的兽医的监督下,将动物饲养在特殊的饲养设施中。食物和水可以随意获得。所有动物实验方案均经武汉大学口腔医院医学伦理**批准。将24只4周龄雌性大鼠随机分为3组:单次注 组(3U/侧)注 到双侧咬肌中一次,三次注 组(3U/侧)注 到双侧咬肌中3次(间隔2周),对照组注 匹配体积的生理盐水。保妥适(Allergan,Irvine,ca)溶液用每0.1ml盐水1个单位稀释。整个实验过程中没有老鼠意外死亡。对所有动物进行腹膜内注 戊**钠(AS1090AspenTechnology,Bedford,ma)以40mg/kg体重的剂量进行麻醉。10周时,过量的药物被用来杀死老鼠。
参照Hyun的方法在下颌骨X线片上确定标记点和测量距离。研究人员对所有动物样品测量3次以进行统计分析,他们对大鼠接受的治 疗情况不了解。
为了检测矿化软骨和软骨下骨,用微型CT(microCT)测量相关数据。
从被杀死的动物身上解剖出左右下颌骨。标本固定在4%仲甲醛溶液在室温下放置24小时,然后在10%中脱钙依地酸持续5周。在酒精中梯度脱水后,标本被包埋在石蜡中。使用横断面制作六微米矢状断面(德国韦茨拉尔徕卡RM2245)。为了评估各组髁突软骨的形态学和组织学差异,人士们进行了苏木精和曙红(HE)染色和组织化学染色。使用OlympusDP72显微镜(日本东京)观察切片。对于HE染色和组织化学分析,从每只大鼠中选择6个切片,在光学显微镜下,从每个切片中随机选择4个区域,用于在盲法条件下获取数据。用PhotoshopCS6测量髁突软骨细胞区和增生区的总厚度。
为了观察不同频率注 肉 毒 毒 素对下颌骨轮廓尺寸,我们检查放影像来测量下颌骨的形态学参数(图1A和B),发现3单次和三次注 肉 毒 毒 素组的下颌高度(CoH和CdH)均低于对照组(图1C)。值得注意的是,三次注 组的CdH低于单次注 组(图1D),单次和三次注 肉 毒 毒 素组的下颌长度(CoL、CdL和GoL)均短于对照组(图1F-H)。类似地,三联注 组的CoL和CdL低于单次注 组(图1,F和G)。与单次注 相比,三次肉 毒 毒 素注 导致下颌轮廓大程度的下降。
因为髁突是下颌骨的生长点,所以进一步分析了髁突的形态学变化。这显微分析表明,与对照组相比,肉 毒 毒 素注 组的皮质和骨小梁BV显著降低。具体地,来自单次注 组的结果显示:(1)髁颈的皮质骨体积损失了平均4.65%的体积(P>0.05)(图2A);(2)BV/TV下降了近10.44%(P<0.05)(图2B);(3)骨小梁数目含量下降了近41.01%(P<0.05)(图2C);(4)骨小梁厚度下降了12.8%(P<0.05)(图2D);(5)骨小梁分离度上涨5.51%(P<0.05)(图2E)。
三次注 组的结果显示
(1)髁突颈部皮质骨体积平均减少24.42%(P<0.05)(图2A);(2)BV/TV下降了近27.71%(P<0.05)(图2B);(3)骨小梁数目含量减小了近50.77%(P<0.05)(图2C);(4)骨小梁厚度下降了23.38%(P<0.05)(图2D);(5)骨小梁分离度上涨7.77%(P<0.05)(图2E)。为了便于观察髁突的形态学变化,通过髁突的microCT扫描进行了三维重建。单次注 组的髁突后表面比对照组粗糙(图2F,G,I,J,L,以及M),而三次注 组表面有明显的凹陷吸收(图2,H,K,以及N)。三次注 肉 毒 毒 素导致髁突中皮质和小梁的BV降低。
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