随州市化妆品氨甲环酸

时间：2022-04-22

氨甲环酸又名传明酸、凝血酸、止血环酸，化学名反-4-氨甲基环己烷甲酸，是具有溶酶作用的药物成分。近年来，由于某**牙膏中添加氨甲环酸事件，使得其走进大众视野，作为止血药物被公众认知。因其出色的止血效果氨甲环酸在医学上多应用于外科手术止血及创伤出血，随着在医学领域的广泛应用，人们发现它还有一个有趣的“副作用”，那就是美白祛斑。有实验证明，不仅口服含氨甲环酸的药物对黄褐斑有**效果，其外用对色斑仍有效果［1］。现如今，在化妆品领域，氨甲环酸作为一种普遍使用的美白剂，已被多国允许使用在化妆品中，例如欧洲、美国等。我国在《已使用化妆品原料目录（2015 版）》中也将氨甲环酸列入允许使用的范围，这更加推动了其发展，在资生堂、欧莱雅等**品牌以及公众熟知的国产美白类化妆品中都有添加，属于常见美白成分。
氨甲环酸的美白机制在于可与体内酪氨酸酶竞争，影响酪氨酸酶对酪氨酸催化作用的代谢，进而抑制酪氨酸酶的活性，或者抑制纤溶酶原转化为纤溶酶。酪氨酸酶与纤溶酶都是黑色素细胞生成黑色素的重要酶，氨甲环酸通过以上两种途径减少或抑制黑色素细胞产生黑色素，从而改善皮肤色素沉积，达到美白淡斑效果［2-6］。国内外有许多文献已经验证了氨甲环酸的美白效果，加之媒体、网络等广泛传播，其中不乏有将氨甲环酸奉为“美白神药”的说辞。而氨甲环酸作为一种广谱美白剂，并非某些博眼球的商家所鼓吹的“神药”，苑辰等［7］在**色素型黑眼圈时外用5%氨甲环酸的产品过程中，约13.8%患者出现一过性的刺激性的接触性皮炎，1 例出现丘疹停用后好转。另外，其关键品质受有关物质含量控制，品质标准中有关物质含量≤0.5%，若**出标准范围，经约半年后可能出现产品发黄现象。因此，有关物质含量控制对产品品质**尤为关键［8］。
综上所述，用于化妆品中氨甲环酸的含量控制是用妆安全的重要环节，应控制在安全有效的范围内，并非越高越好，同时需要警惕不法商家虚假标注，误导消费的情况。本实验经过对不同基质美白化妆品提取，建立高效、快速、灵敏的HPLC-MS/MS方法，为百姓用妆安全、执法监管提供技术支撑。

测试方法
2.1 标准溶液配制
精密称取氨甲环酸标准品10.00 mg，置100 mL容量瓶中，用**纯水溶解稀释定容至刻度，摇匀，作为标准储备液，备用。（该溶液4 ℃下保存期为30 d）。再准确移取适量的上述标准储备液于10 mL容量瓶，制备成标准使用中间液备用。分别吸取适量标准使用中间液置于10 mL 容量瓶中，用80%甲醇配制成5、10、20、30、40 和50 ng/mL 的系列标准工作液，于4 ℃条件下储存。
2.2 样品前处理
取样品0.25 g，精密称定，置25 mL 具塞比色管中，加40%乙腈水溶液20 mL，涡旋至样品完全分散，超声15 min，冷却至室温后用40%乙腈水溶液定容至25 mL，摇匀，以5 000 r/min 离心5 min，上清液过0.22 μm 滤膜，备用。
2.3 仪器条件
2.3.1 液相色谱条件 Agilent XDB-C18 色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；柱温：30 ℃；进样量：2 μL；流动相：A（水）∶B（甲醇）=80∶20；流速：0.4 mL/min。
2.3.2 质谱条件离子源：ESI 源；扫描方式：正离子模式扫描；扫描范围：100～1 000 m/z；喷雾电压：4 500 V；干燥气温度：450 ℃；干燥气流速：1 000 L/h；离子源气体1∶60.0 psi；离子源气体2∶55.0 psi；气帘气：20.0 psi；碰撞气：6 psi；入口电压：10.0 V；质谱采集参数见表1。
结果与讨论
3.1 色谱条件的选择
试验考察了40%甲醇-水、50%甲醇-水、60%甲醇-水、80%甲醇-水以及40%乙腈-水、50%乙腈-水、60%乙腈-水、80%乙腈-水作为流动相体系时对目标物的色谱分离情况。结果表明：以甲醇-水体系、乙腈-水体系为流动相时，氨甲环酸目标峰均可有效分离，尤其是使用80%甲醇-水溶液时，目标峰峰形尖锐对称，响应信号强度较高，在2 min 内可以完成出峰且无干扰峰出现。
3.2 质谱条件的选择
本试验采用快速液相色谱-API 4000 串联质谱仪分析系统，ESI 离子源，采用多反应监测方式。实验中，对质谱的采集模式（Positive 与Negative），质谱的采集条件包括锥孔电压（Cone）、去簇电压（DP），选择提取离子（定性离子和定量离子）及其碰撞能量（CE）等进行了充分优化，获得优化结果。
3.3 提取溶剂的选择
氨甲环酸极性较强，在水中易溶，适合用一定比例水溶液进行提取，本实验分别考察甲醇、乙腈、乙醇在不同比例（20%、40%、80%）情况下对样品的提取效果。结果表明，氨甲环酸回收率均在80.4%～118.5%之间，其中40%乙腈作为提取溶剂时，低、中、高水平添加回收率在95.4%～97.6%之间，较接近**，且相对标准偏差小于10%，选择40%乙腈作为提取溶剂效果较佳。
3.4 线性关系
实验考察氨甲环酸的线性行为，精密吸取浓度范围为5～50 μg/L 的系列标准溶液，记录峰面积，以质量浓度（X）为横坐标，对应峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示：氨甲环酸在5～50 μg/L 范围内与其峰面积呈良好线性关系，线性回归方程为Y=4 761.3X+4 134.2，线性相关系数r=0.999 9。
3.5 基质效应考察
实验选择市售6 种不同基质、不含目标物质的美白化妆品，分别为霜、水、乳、精华、膏、面膜，以不同基质样品待测溶液配制氨甲环酸标准溶液和用80%甲醇作为稀释剂配制氨甲环酸标准溶液，比较上述标准溶液的质谱相应情况。基质效应（ME）的计算等于基质标准溶液与对应浓度的80%甲醇溶液配制氨甲环酸标准溶液质谱响应百分比减去100，若结果为负值，则为基质抑制，若结果为正值，则为基质增强［9］。结果显示：上述6 种不同基质标准溶液基质效应增强或抑制效果均不明显（-5.3%～1.8%），与80%甲醇溶液配制标准溶液质谱响应基本一致，因此认为该方法基本不存在基质效应。
3.6 回收率试验与精密度
分别选取美白爽肤水、美白乳、美白霜、美白精华、美白面膜、美白洁面膏六种类型阴性产品，按照试验方法分析，并进行加标实验。设定高、中、低添加水平，平行试验6 份。记录待测物色谱峰面积，计算回收率和相对标准偏差（RSD）。结果表明，建立的方法对不同基质美白化妆品具有良好的回收率，相对标准偏差均小于10%。
选取目标物质含量为6.35 μg/g 的阳性样品，按照实验方法重复测定6 次，计算精密度，结果表明，阳性样品含量为6.35 μg/g（氨甲环酸检出），RSD 值为0.5%。取阴性样品6 份，加入氨甲环酸对照品溶液（0.1 μg/g）按试验方法测定，计算精密度，结果表明，样品含量为0.098 μg/g，RSD 值为1.2%。试验结果表明，方法精密度良好，满足实验要求。
3.7 检出限与定量限
取不含目标物质的阴性样品适量，精密称定，加入不同体积的氨甲环酸标准溶液，按照试验方法测定，选择3 倍信噪比（S/N=3）时的标准溶液浓度为仪器检出限，选择10 倍信噪比（S/N=10）时的标准溶液浓度为定量限。本方法氨甲环酸的检出限为0.1 μg/kg，定量限为0.3 μg/kg。
3.8 实际样品分析
随机选取市售美白类化妆品48 批，其中包含美白乳液10 批、美白面霜10 批、美白润肤水7 批、美白精华10 批、美白面膜5 批、美白洁面膏6 批。按试验方法进行分析，结果显示：阴性样品分析未见干扰成分，各品类均有阳性样品检出，检出率高达27.1%，检出含量范围在0.02～1 231.60 mg/kg之间。含量较高类别为精华类，面霜类、乳液类、面膜类、润肤水、洁面膏含量差异较小，低于精华类。可见，氨甲环酸作为一种美白剂被广泛用于化妆品中，可能是美白祛斑功效的核心成分。

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词条说明
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