高通量测序（NGS）应用科普

时间：2022-07-21

高通量测序技术在**基因检测中应用广泛。一方面通过基因测序可以找出癌症的突变基因，从而迅速确定对症药物；另一方面，样本类型可以是患者的血液甚至唾液，*传统的病理切片，减少诊断过程中对患者机体的损伤。下面我们来简单介绍NGS在**样本基因检测应用中的流程。

_{1、样本接收与质量控制}

血浆样本要求：

用于ctDNA检测的血液采集量必须在8ml以上，使用专业的BunnyTube^TM游离DNA样本保存管室温保存运输到中心实验室。

**石蜡样本（FFPE）要求：

①整个福尔马林固化石蜡包埋组织蜡块；②组织大小>0.5*0.5cm，切出5-10张未染色处理过的石蜡组织，厚度2-5μm；③组织大小<0.5*0.5cm，需10-15张，制成切片或直接保存到1.5mlEP管内**细胞含量不低于10%，坏死组织不大于70% 。玻片盒上要标明姓名、出生日期和采集日期，常温保存即可。

2、样本DNA提取与破碎

针对不同样本类型运用不同提取试剂盒，提取所需DNA，并通过超声波破碎方法，使大分子片段的DNA行成一定长度范围内的短序列片段。

3、文库构建与富集

文库构建：将提前准备好的接头添加到提取到的DNA片段中，然后通过DNA分选与纯化试剂盒，去除不符合要求的大、小DNA片段以及多余的接头及其他杂质。

文库富集：通过加入阻断寡核苷酸--分子杂交（加入探针与目标杂交捕获）--吸附探针（加入磁珠从而吸附探针）--磁沉降（用磁铁捕获目标片段，洗脱掉off-target片段），实现目标DNA片段的选择。

4、高通量测序

5、生信分析与报告生成

样本数据下机后，计算中心根据不同实验项目的要求，对数据使用不同的分析，计算方法进行分析。再根据生信信息分析的结果生成一份具体的报告，以便医生解读。

兔牙生物科技产品专为NGS开发设计，广泛应用于**基因检测，产前筛查及宏基因组测序。

词条
词条说明
如何选择适合的DNA提取试剂盒？
实验室工作中，经常会需要用到纯化的DNA，这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒，当使用不太熟悉的样本类型时，选择合适的盒子是尤为关键的，本文将分享考虑建议以供选择参考。试剂盒组分目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤: 裂解，柱纯化，洗涤杂质，柱洗脱。然而，不同的盒子在完成每个步骤的方式上
游离DNA样本保存管
血浆游离DNA（cell-free DNA, cfDNA）是**诊断和无创产前筛查的重要检测样本，它的质量会直接影响检测结果的准确性和稳定性。游离DNA样本保存管可直接用于全血的采集、保存和运输，能够有效保护cfDNA不受核酸酶的降解，避免血液有核细胞中基因组DNA的释放，较大地保证了cfDNA的下游应用。本产品使用EDTA抗凝剂和特殊保护剂，经500例真实临床样本验证，在4-37℃条件下稳定保存
FFPE提取 FFPE样本DNA提取
FFPE（Formalin-fixed paraffin-embedding）样本是医学领域常见的生物材料。此类样本已经被广泛应用于高通量测序、原位杂交、*组织化学等研究领域。目前据估计，**约有数十亿FFPE组织样本保存在医院或者组织样品库中，这些组织样本是疾病诊断和科学研究的较为宝贵的的生物学资源之一。FFPE样本随着基因组学检测技术的快速发展，尤其新一代测序技术（NGS）的飞速发展，在细胞
磁珠分选纯化试剂盒推广应用
基于 SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization ) 技术，在磁珠法反应体系中，核酸分子（DNA & RNA）会由线性压缩成球状， DNA 在一定浓度的 PEG 存在条件下，NaCl 或 MgCl2 促进条件下，DNA 分子构象会发生急剧变化，会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，与表面带负电荷的羧基-COOH 磁珠结合。目前认为这种负负电荷